Страница 111 из 371
Во-вторых, рассмотренная методика работает еще и потому, что количество материалов, помещаемых в 800-граммовую банку, является незначительным. Такое количество субстрата может быть нагрето и остужено за короткое время, поэтому некоторая часть перекиси остается нетронутой и после паровой обработки. Большее количество субстрата потребует более длительного нагрева и будет дольше остывать, поэтому в этом случае, скорее всего, придется добавлять большее количество перекиси, чтобы хоть какая-то его часть гарантированно уцелела. При необходимости вы сможете экспериментальным путем определить необходимое количество добавляемой перекиси.
Субстрат на основе опилок, стерилизованных под давлением
Если вы не хотите использовать опилочные гранулы в качестве источника опилок или желаете использовать необработанную азотную добавку типа отрубей, вам придется стерилизовать субстрат под давлением и добавить раствор перекиси после остывания среды. Вам нужно будет простерилизовать отдельно достаточное количество воды, чтобы растворить перекись в одной третьей или в половине общего объема воды, добавляемой к субстрату. После отмеривания необходимого количества раствора перекиси, вылейте его в субстрат и затем хорошо перетрясите, чтобы равномерно распределить жидкость.
Вот описание процесса, который я раньше использовал:
1. Добавьте примерно половину воды, необходимой для приготовления субстрата, во все контейнеры, которые вы хотите приготовить
2. Отмерьте и простерилизуйте достаточное количество воды, которую вы позже будете добавлять в каждый контейнер в качестве второй половины жидкости вместе с перекисью.
3. После охлаждения стерилизованной воды, добавьте в нее перекись, чтобы получить раствор 1:10 (т. е. добавьте 3 % перекись в количестве, примерно равном 1/10 общего объема воды)
4. Отмерьте индивидуальное для каждого контейнера количество воды с помощью мерного цилиндра, пастеризованного при помощи кипящей воды.
5. Вылейте отмеренное количество воды в каждый контейнер с субстратом (получим дополнительное разбавление 1/2, т. к. контейнеры уже содержат половину воды), следя за тем, чтобы капли воды, стекающие по внешней поверхности цилиндра, не попадали в субстрат (капли следует вытирать) и немедленно перемешайте содержимое контейнера.
Отношение вода/раствор перекиси станет примерно 1/20, что примерно соответствует концентрации перекиси 0.15 %, т. е. такой же, как и для зернового субстрата.
Зерновой субстрат
Если вы решили, что вам нужен зерновой субстрат, я должен предупредить вас (особенно если вы никогда не делали зерновой субстрат раньше), что его приготовление может оказаться трудным даже при добавлении перекиси. Причина заключается в том, что зерно, продаваемое в магазинах может содержать большое количество эндогенных источников заражения, которые непросто уничтожить посредством стерилизации под давлением.
Иными словами, не смотря на то, что я применял длительную стерилизацию под давлением и использовал значительные количества перекиси, мне так и не удалось достичь стабильных, без заражений, результатов на зерне ржи, которое я приобретал в местном магазине.
К счастью, у меня была возможность использовать другое зерно, называемое мягкой белой пшеницей. Оно имеет гораздо большую первоначальную влажность, чем рожь (30 % против 8 % у ржи), но вместе с тем, выглядит значительно чище.
Хорошие результаты с мягкой белой пшеницей были достигнуты тогда, когда перед стерилизацией в скороварке я замачивал это зерно на ночь в определенном количестве горячей воды из-под крана, или же когда я замачивал зерно в избытке горячей воды. Субстрат, свободный от заражения, получался каждый раз, когда я использовал этот вид зерна.
К сожалению, мягкая белая пшеница не всегда бывает в продаже, а кроме того, к ней нередко подмешивают твердые коричневые сорта пшеницы, т. е. зерно низкой влажности, с которым случаются те же проблемы, что и с рожью.
Какое бы зерно вы ни выбрали, удостоверьтесь в следующем:
1. Субстрат полностью стерилизован перед добавлением перекиси.
2. Удалены все следы субстрата (питательной среды) с внешней поверхности контейнера.
Безусловно, проблема тщательной стерилизации существует и в случае приготовления субстрата в среде с фильтрованной атмосферой. Если споры плесени или бактерии находятся внутри зерен (в сердцевине) или в других частицах, составляющих субстрат, и они не были уничтожены путем автоклавирования или обработки в скороварке, то они могут прорасти и испортить субстрат вне зависимости от наличия фильтрованной атмосферы или добавленной перекиси. Неполная стерилизация означает также, что в зерне остается некоторое количество перекисеразрушающих ферментов, что приводит к появлению в субстрате областей, не защищенных перекисью.
Вторая проблема существует и в обычной практике культивирования. Если следы питательной среды попадают на внешнюю поверхность контейнера, это место впоследствии может стать центром заражения и распространения спор. Если такое случается с субстратом, который защищен перекисью, то культура может оставаться чистой до тех пор, пока не произведено ее перетряхивание для распределения мицелия. Но через несколько дней заражение станет более чем явным, т. к. микроорганизмы воспользуются недостатком перекисной защиты в новых многочисленных местах роста мицелия. Эту проблему можно предотвратить, тщательно очищая контейнеры изнутри и снаружи перед использованием и протирая внешнюю поверхность контейнеров спиртом после проведения инокуляции субстрата.
Вот как я делаю субстрат из мягкой белой пшеницы.
1. Помещаю 200 мл зерна в 800 гр банку.
2. Добавляю с избытком горячую воду из-под крана плюс небольшое количество питьевой соды, чтобы скорректировать кислотность воды.
3. Замачиваю зерно при температуре, близкой к кипению воды, в течение часа или двух, чтобы насытить водой сердцевину зерна, когда зерно увеличится в объеме примерно вдвое, я сливаю лишнюю воду.
4. В заключение, я стерилизую банку в зерном в скороварке в течение часа. Точное время стерилизации зависит от зерна и скороварки.
5. После охлаждения банки я добавляю 10 мл 3 % перекиси (или 20 мл перекиси на каждые 0.5 л первоначально взятого зерна), а затем хорошо перетряхиваю банку, чтобы перекись покрыла зерна.
Один грибовод добавляет к перекиси краситель, чтобы знать, когда перекись тщательно распределится по зерну. Если зерно заметно слипается, то достичь полного покрытия зерен будет непросто. В этом случае вам придется подобрать количество воды и не замачивать зерно в течение слишком долгого времени.
Окончательная концентрация перекиси является высокой, примерно 0.15 %, но грибной мицелий при этом растет хорошо, может быть только немного медленнее, чем без добавления перекиси (если вы готовите субстрат, добавляя отмеренное количество воды, то для достижения правильной влажности содержимого не забывайте вычитать из количества добавляемой воды объем перекиси).
В принципе, вы можете добавлять и меньшее количество перекиси, но если вы добавите меньше, чем 20 мл 3 % раствора на каждые 0.5 л зерна, вам скорее всего, придется перед добавлением разбавить перекись в большем объеме стерильной воды, чтобы обеспечить надежное покрытие зерна этим раствором. С другой стороны, в большинстве случаев вы можете добавлять до 40 мл перекиси без серьезного влияния на рост мицелия.
Контейнеры для субстрата
Я выращиваю мицелий в 800 г банках из-под соуса, потому что мне легче их достать. У этих банок крышки заворачиваются по резьбе. Литровые банки для консервирования тоже подойдут, особенно если у них есть резьбовые крышки, но крышки с внешним фиксатором тоже подойдут, если вы поместите внутрь их картонный диск несколько большего, чем надо, размера, чтобы обеспечить нужную высоту крышки для правильной фиксации.