Страница 76 из 134
Секвенирование ДНК
В методе секвенирования с использованием меченых флуоресцентной меткой или радиоактивным изотопом дидезоксинуклеотидов ПЦР является неотъемлемой частью, так как именно в ходе полимеризации в цепь ДНК встраиваются производные нуклеотидов, меченые флуоресцентной или радиоактивной меткой. Это останавливает реакцию, позволяя определить положения специфических нуклеотидов после разделения синтезированных цепочек в геле.
Мутагенез
В настоящее время ПЦР стала основным методом проведения мутагенеза. Использование ПЦР позволило упростить и ускорить процедуру проведения мутагенеза, а также сделать её более надежной и воспроизводимой.
Примечания
1. Kleppe, К. et al. (1971): Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA's as catalyzed by DNA polymerases. In: J. Mol. Biol. Bd. 56, S. 341–361. PMID 4927950
2. Нобелевские лауреаты по химии, 1993 г.(англ.)
3. R. К. Saiki, D. H. Gelfand, S. Stoffel, S. J. Scharf, R. Higuchi, G. T. Horn, К. B. Mullis, H. A. Erlich. Primer-Directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase, in: Science. 239.1988, 487–491. ISSN 0036–8075 PMID: 2448875
4. Каледин А. С., Слюсаренко А. Г., Городецкий С. И. // Биохимия.- 1980. — Т. 45. — С. 644–651.
5. http://www.roche.com/med-cor-2005-09-12
6. 1 kbp (kilo base pair(англ.)) — 1 тысяча пар оснований, единица измерения длины ДНК
7. Venter J, et al. (2001). «The sequence of the human genome». Science
291 (5507): 1304-51. PMID 11181995
8. http://www.biofidal.com/biofidal2/cat/2/pyro.php
9. Отжиг (англ. a
10. Шпилька — внутримолекулярная самокомплементарная структура
11. Димер — межмолекулярные структуры, образуемые праймерами друг с другом или сами с собой
12. [http://www.dna-technology.ru/doc/DNA-Technology_PCR-base.pdf «Теоретические основы ПЦР» (PDF)]
Литература
1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с, илл. ISBN 5-03-003328-9
2. Щелкунов С. Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с; илл. ISBN 5-94087-098-8
3. Патрушев Л. И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-Х
Словарь терминов
А
• Аберрация хромосомная (или хромосомная аномалия) — обобщенное название любого из типов хромосомных мутаций: делеций, транслокаций, инверсий, дупликаций. Иногда также обозначают и геномные мутации (анеуплодии, трисомии ит. д.).
• Авторадиография — способ обнаружения вещества, меченного радиоактивным изотопом, путем наложения на чувствительную пленку.
• Акроцефалия (оксицефалия) — высокий «башенный» череп.
• Аллель — одна из двух или более альтернативных форм гена, каждая из которых характеризуется уникальной последовательностью нуклеотидов; аллели, как правило, отличаются последовательностями нуклеотидов.
• Аллель дикого типа (нормальный): мутация гена, не затрагивающая его функции.
• Аллель доминантный: аллель, одна доза которого достаточна для его фенотипического проявления.
• Аллель мутантный: мутация гена, нарушающая его функцию.
• Аллель рецессивный: аллель, фенотипически проявляющийся только в гомозиготном состоянии и маскирующийся в присутствии доминантного аллеля.
• Аллельные серии — моногенные наследственные заболевания, вызванные различными мутациями в одном и том же гене, но относящиеся к разным нозологическим группам по своим клиническим проявлениям.
• Алопеция — стойкое или временное, полное или частичное выпадение волос.
• Альфа-фетопротеин (АФП) — эмбриональный белок, обнаруживаемый в крови плода, новорожденного, беременной женщины, а также в амниотической жидкости.
• Амниоцентез — прокол амниотического мешка с целью получения амниотической жидкости.
• Ампликон — внехромосомная единица амплификации.
• Амплификатор ДНК (термоциклер) — прибор, необходимый для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР); позволяет задавать нужное количество циклов и выбирать оптимальные временные и температурные параметры для каждой процедуры цикла.
• Амплификация — увеличение числа копий генов (количества ДНК)
• Амплификация ДНК — выборочное копирование определенного участка ДНК.
• Амфидиплоиды — эукариотические клетки, содержащие два двойных набора хромосом в результате объединения двух геномов.
• Анеуплодия — измененный набор хромосом, в котором одна или несколько хромосом из обычного набора или отсутствуют, или представлены дополнительными копиями.
• Аниридия — отсутствие радужной оболочки.
• Анкилоблефарон — сращение краев век спайками, покрытыми слизистой оболочкой.
• Анофтальмия — отсутствие одного или обоих глазных яблок.
• Антибиотик — вещество, подавляющее рост клеток или убивающее их. Обычно антибиотики блокируют одну из стадий синтеза белков или нуклеиновых кислот.
• Антиген — вещество (обычно белки, реже полисахариды), вызывающее у животных иммунный ответ (образование антител).
• Антигенная детерминанта (эпитоп) — участок белковой или полисахаридной молекулы, обладающей способностью вызывать образование антител данной специфичности.
• Антикодон — последовательность из трех нуклеотидов в молекуле транспортной РНК, комплементарная кодирующему триплету в молекуле мРНК. Антимонголоидный разрез глаз — опущены наружные углы глазных щелей. Антимутагенез — процесс предотвращения закрепления (становления) мутации, т. е. возврат первично поврежденной хромосомы или гена в исходное состояние.
• Антитело — белок (иммуноглобулин), образуемый иммунной системой организма животных в ответ на введение антигена и способный вступать с ним в специфическое взаимодействие.
• Антиципация — нарастание тяжести течения заболевания в ряду поколений. Анэнцефалия — полное или почти полное отсутствие головного мозга.
• Аплазия (агенезия) — полное врожденное отсутствие органа или части его. Арахнодактилия — необычно длинные и тонкие пальцы.
• Ассортативные браки — браки, при которых выбор брачного партнера по одному или нескольким признакам неслучаен.
• Аутосома — любая неполовая хромосома. У человека имеется 22 пары аутосом.
• Аутосомно-доминантное наследование — тип наследования, при котором одного мутантного аллеля, локализованного в аутосоме, достаточно, чтобы болезнь (или признак) могла быть выражена.
• Аутосомно-рецессивное наследование — тип наследования признака или болезни, при котором мутантный аллель, локализованный в аутосоме, должен быть унаследован от обоих родителей.
• Ахейрия (аподия) — недоразвитие или отсутствие кисти (стопы).
Б
• Бактериофаг — вирус бактерий: состоит из ДНК или РНК, упакованной в белковую оболочку.