Страница 104 из 371
Приобретают ли микроорганизмы, вызывающие заражение, устойчивость к воздействию перекиси, как это происходит в случае с антибиотиками? И да и нет. Многие из таких микроорганизмов уже устойчивы к перекиси, и если они образовали колонию, дальнейший ее рост будет очень интенсивным. Например, живая форма сине-зеленой плесени Aspergillus очень устойчива к перекиси. Тем не менее, перекись в достаточной концентрации несомненно преодолевает защитные механизмы одноклеточных организмов и отдельных спор, а также очень небольших изолированных многоклеточных организмов.
Чего перекись не может обеспечить
Перекись не отменяет полностью необходимость соблюдения правил стерильной работы. Повторюсь: не смотря на то, что добавленная перекись будет уничтожать отдельные споры, грибки и бактерии, пробравшиеся в ваши грибные культуры (а именно эти микроорганизмы являются основным источником проблем с заражением), перекись не сможет прекратить жизнедеятельность развитых многоклеточных организмов (например зеленой плесени), если размер колонии превысит некоторый размер. Перекись также не будет слишком эффективным против значительного скопления спор плесени. По всей видимости, многоклеточные организмы и большие скопления проросших спор способны вырабатывать достаточное количество разрушающих перекись ферментов для того, чтобы защитить себя от высоких концентраций перекиси во внешней среде. И в связи с тем, что микроскопические многоклеточные организмы и скопления спор могут находиться на ваших руках, частицах грязи и пыли, вам все равно придется соблюдать определенные меры предосторожности и держать ваши руки и любые нестерильные предметы подальше от культур на ранних сроках их развития, даже при добавлении перекиси. Несмотря на то, что можно не бояться оставлять культуры на открытом воздухе в течение непродолжительного времени для выполнения манипуляций или проверки их состояния, вам все равно придется предпринимать разумные меры против заражения. Например, не стоит более использовать крышку от чашки петри, если она упала на пол. Не стоит также допускать попадания на культуру какого-либо мусора или проникновения насекомых. Хорошим правилом будет периодическое вытирание пыли с полок, используемых для инкубации культур. В любом случае придется стерилизовать на пламени (или как-то еще) всякий инструмент, который используется для переноса ломтиков мицелия с одной культуры на другую. Лично я регулярно протираю пальцы спиртом перед выполнением инокуляций субстрата или агаровых культур. Я делаю то же самое со всеми поверхностями, на которых я произвожу манипуляции с чашками петри. Это уменьшает вероятность попадания в культуру крупных частиц и способствует защите открытого мицелия.
Очень важно знать и помнить, что перекись не защищает сам грибной мицелий от аэробных контаминантов. Мицелий разлагает перекись, с которым он контактирует, поэтому любые аэробные контаминанты, находящиеся по соседству с мицелием, будут ограждены от губительного воздействия перекиси. Таким образом, в общем случае, перекись лишь защищает питательную среду или субстрат от аэробного заражения. Необходимость самой аккуратной работы остается актуальной для процесса переноса мицелия или для любой другой операции, подразумевающей нахождение мицелия в нефильтрованной атмосфере. Поэтому, если заражение мицелия все-таки произошло, вам придется начать все заново с чистой, незараженной культуры или каким-либо образом очистить мицелий от контаминантов. Мы рассмотрим этот вопрос позже.
Напоследок отмечу, что перекись не является стерилизующим агентом, за исключением столь высоких концентраций, когда его использование уже не совместимо с ростом грибов. Таким образом, вы, в общем случае, не можете использовать перекись, как таковую, для стерилизации питательной среды или субстратов. В концентрациях же, совместимых с ростом грибов, перекись водорода не будет уничтожать живые формы плесневых контаминантов, находящихся в среде и подвергнется быстрому разложению под воздействием ферментов, содержащихся в нестерильных органических материалах. Хотя некоторые споры бактерий и будут убиты перекисью после ее добавления в нестерильную среду, гораздо большее число контаминатнов без труда выживет и через непродолжительное время начнет свой рост. В этой связи следует запомнить: материалы среды и контейнеры должны быть пастеризованы перед добавлением перекиси или заполнением перекисесодержащими средами; питательные среды, которые содержат сырые, не подвергавшиеся обработке органические вещества, должны быть стерилизованы под давлением для того, чтобы разрушить ферменты, разлагающие перекись. И последнее: вода, не подвергнутая стерилизации под давлением, при использовании в составе среды с перекисью должна быть чистой и не должна содержать видимых частиц. Любые частицы органической и даже неорганической природы, вносимые с водой в среду, могут содержать живые микроорганизмы и/или разлагающие перекись катализаторы, которые не обязательно будут уничтожены во время пастеризации.
Безопасность применения перекиси водорода и влияние на окружающую среду
При использовании 3 % перекиси водорода не требуется соблюдения каких-либо особых мер предосторожности. Токсичность перекиси в такой концентрации весьма низка и он полностью разлагается на воду и кислород при разливании или попадании внутрь. 3 % перекись не обладает запахом, не оставляет пятен и не вызывает ожогов. При температуре ниже 60 °C (температура очень горячей воды из-под крана) она даже не действует как отбеливатель. Все свидетельствует о том, что такая перекись не опасна для окружающей среды.
В связи с тем, что промышленная перекись изготавливается химическим путем, а не извлекается, скажем, из натуральных источников, он, скорее всего, не может рассматриваться как экологически чистая субстанция, отвечающая требованиям новомодных сертификационных стандартов. Тем не менее, я считаю, что использование перекиси вполне соответствует духу экологически чистого культивирования. Поскольку перекись, добавленная к грибной культуре, полностью разлагается на воду и кислород по мере того, как грибной мицелий захватывает субстрат, после снятия урожая в грибах от перекиси не останется и следа. Разложение перекиси происходит по причине вполне естественных процессов метаболизма. Более того, перекись водорода сама по себе может быть обнаружена во всех аэробных организмах и во многих натуральных средах. С незапамятных времен пчелы выделяют ферменты, добавляющие перекись в нектар, защищая его от бактерий, грибков и плесени, чем и обусловлены антибактериальные свойства меда. Мицелий по крайней мере некоторых видов грибов производит собственную перекись, которая помогает разрушать древесные субстраты, встречающиеся на пути этих грибов. Даже в человеческом организме перекись является частью защитных механизмов, способствующих выздоровлению. Более того, тысячи приверженцев перекисной системы оздоровления по всему свету принимают внутрь перекись во время еды и называют это перекисной терапией. Считается, что ежедневный прием перекиси приводит к оздоровлению при различных заболеваниях и усиливает жизненные силы организма, а некоторые люди принимают перекись годами (хотя лично я бы не рекомендовал подобных методик…). Наконец, применение перекиси избавляет от использования ресурсоемкого оборудования, оснастки и сопутствующих приспособлений, упрощая каждый этап процесса культивирования грибов.
Есть один вопрос, относящийся к воздействию перекиси на грибной субстрат в качестве оксиданта. Хлор, когда он реагирует с органическими материалами типа бумажной пульпы, производит небольшие количества диоксина, очень опасного канцерогенного вещества. Перекись не производит диоксина и, вследствие этого,
борцы за экологию призывают производителей бумаги отбеливать бумажные волокна перекисью, а не хлором. Опять же, нельзя полностью исключать того, что перекись может вызывать образование других опасных веществ, когда она реагирует с органическими материалами в грибных субстратах, хотя я считаю это весьма маловероятным. Например, аэробные организмы прошли через миллионы лет эволюции, окруженные перекисью и имея ее внутри себя. Перекись образуется в процессе нормального аэробного метаболизма и формируется в естественных условиях при реакции воды с кислородом под воздействием солнечного ультрафиолета. Это означает, что аэробные организмы, скорее всего, приобрели метаболический механизм, позволяющий безопасно иметь дело с различными продуктами окисления, которые образуются в результате реакции перекиси с биологическим материалом. Кроме того, перекись водорода в стерилизованных грибных субстратах ведет себя химически стабильно, а концентрация перекиси, которую мы будем использовать, так низка, что реакции окисления в субстрате должны быть весьма незначительными. Наконец, я ни разу не наблюдал мутагенного или токсического влияния субстрата, обработанного перекисью, на мицелий или плодовые тела грибов. Агаровые среды, содержащие перекись водорода, дают превосходные, здоровые ореолы мицелия, а конечные плодоносящие культуры производят такие же замечательные грибы, как и при использовании традиционных методов культивирования.